Тест-система Canine Ehrlichia Antibody Test Kit предназначена для определения титров антител в сыворотке крови собак к Ehrlichia canis. У собаки вырабатываются высокие уровни антител IgG после заражения. Это даёт возможность получить важную диагностическую информацию в клинических случаях, протекающих с неспецифическими признаками заболевания и у «здоровых» собак, которые могут находиться в субклинической стадии заболевания. Рассчитана от 1 до 12/120 определений (в зависимости от набора).

Время постановки 20 мин
Чувствительность 100%
Специфичность 94.1%
Количество тестов 12/120
Индивидуальный анализ Есть

ImmunoComb® CANINE EHRLICHIA ANTIBODY TEST KIT ИНСТРУКЦИЯ

Предназначен для 12/120 исследований 30.12.2008

1.Назначение

Бесприборная ИФА тест-система Canine Ehrlichia Antibody Test Kit предназначена для определения титров антител в сыворотке крови собак к Ehrlichia canis.

2.Общая информация

Это инфекционное заболевание является одним из клещевых заболеваний собак, как правило, вызываемое Ehrlichia canis. Возбудитель Ehrlichia canis является первичным клещевым паразитом, и поэтому клещи также образуют резервуар возбудителей. Эрлихиоз является широко распространенным заболеванием собак в тропических и субтропических областях. Заражение осуществляется через слюну клещей и в редких случаях при переливании крови или через зараженные иглы. Является мультисистемным заболеванием и его клинические признаки меняются в зависимости от тяжести и длительности заболевания. Поражая в первую очередь моноциты у собаки, болезнь получила название Canine Monocytotrophic Ehrlichiosis (CME).

3.Что такое IMMUNOCOMB®?

Тест ImmunoComb® является модифицированным иммуноферментным анализом, который может быть описан как точечный анализ с использованием вторичных антител, меченных ферментом, при котором определяется уровень антител в сыворотке или цельной крови. Набор содержит все необходимые реагенты для выполнения теста. Результаты анализа Ehrlichia canis доступны в течение 20 минут.

4.Как работает IMMUNOCOMB®?

 Набор ImmunoComb® содержит два основных компонента: Гребень в виде пластиковой карты, далее Гребень и Проявочную ванну.

 Гребень имеет 12 зубцов, рассчитанных на 12 тестов. Каждый зубец последовательно проходит через все соответствующие ячейки каждого ряда Проявочной ванны. Для индивидуального или группового исследование отламывается необходимое количество зубцов Гребня.

 Диагностическая точка антигена E. canis нанесена на нижнюю точку каждого зубца Гребня. Верхняя точка — Положительный контроль.

 На первом этапе образец сыворотки, плазмы или цельной крови вносится в ячейку ряда А Проявочной ванны.

 Далее Гребень вставляется в ячейку с образцом и переносится в оставшиеся ячейки через определенный интервал времени в соответствии с инструкцией (п. VII). Специфичные IgG антитела из образца при их наличии связываются с антигеном на точке зубца Гребня и помечаются в ряде С, который содержит меченные ферментом антитела к IgМG антителам собаки.

 После еще двух промывок (ряд D и E) Гребень переносится в следующую ячейку (ряд F), где проявляется цвет благодаря ферментативной реакции.

 Интенсивность цвета результата соответствует уровню антител в тестируемом образце. Результаты оцениваются с использованием точки Положительного контроля и калибровочной шкалы CombScale.

5.Клинические признаки

Течение болезни протекает в три этапа:
1 -й этап: ранней или острой стадии инфекции включает в себя неспецифические клинические признаки, которые могут быть скрытыми и слабовыраженными и могут пройти незаметно для владельца собаки. У некоторых собак появляется снижение аппетита с повышенной температурой и вялость. После осмотра ветеринарный врач может обнаружить увеличение лимфоузлов и селезёнки. Снижение количества тромбоцитов является наиболее выраженным показателем при гематологии. Если животное не лечилось, то большинство собак может "выздороветь" от острой стадии заболевания. Тем не менее, они не обязательно поправились, и таким образом может начаться второй этап инфекции.
2 -й этап: Это субклиническая стадия инфекции (т.е. нет признаков болезни), которая может длиться неопределенный срок. Правильное лечение на этой стадии, особенно у животных с высоким риском заболевания, является важным для того, чтобы
предотвратить дальнейший прогресс заболевания.
3 -й этап: Непонятно, что заставляет некоторых собак переходить от субклинической стадии в хроническую (3-ю) стадию эрлихиоза. Однако признано, что после того, как собаки достигли этой стадии, попытки лечения часто малоэффективны. Клинические признаки хронического эрлихиоза включают сильную вялость, лихорадку, потерю аппетита и веса, частые кровотечения и в конечном итоге смерть.

6.Диагностика

Диагноз CME в значительной мере основан на клинических признаках при остром и хроническом этапе заболевания. Принимая во внимание, что снижение количества тромбоцитов является наиболее важным при гематологическом исследовании показателем, серологическое исследование является предпочтительным методом для подтверждения инфекции E.Canis. Это особенно важно во 2-й стадии заболевания, когда клинические проявления отсутствуют. (См. рис. 1)

7.Процедура анализа на ИммуноКомб

Анализ проводится при температуре 200-250C (680—770F).

1. Забрать образец крови у собаки.

2. Используйте пипетку или капилляр*.

При тестировании цельной крови используйте 10 мкл При тестировании сыворотки/плазмы используйте 5 мкл
3. Используйте пинцет для вскрытия алюминиевой защитной пленки ряда А (одна ячейка для одного образца).

4. Внесите образец в ячейку ряда А. Для перемешивания поднимите и опустите пипетку/поршень несколько раз.

Не открывайте ячейки ряда А или других рядов, которые вы не собираетесь использовать.

По запросу можно приобрести набор из 40 капилляров и 1 поршня.

5. Выньте гребень из защитной обертки. Для тестирования менее 12 образцов, разрежьте или отломите Гребень по меткам в зависимости от количества тестов. Вставьте Гребень в открытую ячейку/ячейки ряда А (печатной стороной к себе) и инкубируйте 5 минут. Для улучшения перемешивания аккуратно передвигайте Гребень вверх вниз в начале каждой инкубации (каждого ряда). Повторите это движение как минимум дважды во всех
остальных рядах.

6. Используйте пинцет для вскрытия следующего ряда (ряд В) и вставьте Гребень на 2 минуты. До перенесения Гребня из одного ряда в следующий, вскройте последующий ряд. Удалите капли жидкости с заостренных концов зубцов Гребня с помощью чистой фильтровальной бумаги. Не прикасайтесь к фронтальной поверхности Гребня. Вставьте Гребень в следующий ряд (ряд С) на 5 минут. Переместите Гребень в оставшиеся ячейки (ряд D и E) на 2 минуты в каждой, а в последнюю ячейку (ряд F) на 5 минут.

7. По завершению проявления цвета в ряде F переместите Гребень обратно в ряд E на 2 минуты для фиксации цвета. Выньте Гребень и дайте ему высохнуть в течение 1-10 минут. 

8.Чтение и интерпретация результатов

Верхняя точка должна дать пурпурно-серый цвет. Это тот же тон цвета, который создается при значительном положительном ответе. Эта точка должна читаться, как S3 на шкале от S0 до S6/S3 считается точкой отсчета уровня IgG антител, что примерно эквивалентно положительному иммунному ответу при титре 1:80 по иммунофлуоресцентному анализу (РИФ).

Нижняя точка Гребня дает результат E.Canis антител IgG в образце теста. Сравните цвет нижней и верхней точки. Четкая, видимая пурпурно-серая точка показывает на положительный результат. Более темная точка, чем точка положительного контроля, указывает на высший титр. Более слабый цвет указывает на низкий ответ, который приблизительно равен от 1:20 до 1:40 титру по иммунофлуоресцентному анализу (РИФ).

Для оценки титра используйте CombScale, который входит в набор (см. раздел IX).

9.Чтение результатов по шкале CombScale

Значение S — это число, которое появляется в желтом окошке, соответствующем цвету тестовой точки при откалиброванном приборе по положительному контролю, соответствующему S3.

Когда Гребень полностью высохнет, откалибруйте его по шкале CombScale. Найдите тон пурпурно-серый на шкале, который наиболее близко подходит к точке Положительного Контроля (верхняя точка). Двигая желтую линейку, найдите отметку С+, появившуюся в окошке над цветом, который вы только что нашли.

Держите линейку в таком положении на протяжении всего чтения результатов. Этот шаг фактически калибрует С+ и S3, с которым и будут сравниваться точки теста.

Удерживая линейку, найдите тон на шкале, который будет наиболее точно подходить к точке результата теста (нижняя точка). Значение, которое появится в окошке сверху,

является оценкой CombScale (S0-S6).

10.Пример использованного Гребня

Номер теста Результат Примечание
1 ≥S5 Высокая положительная реакция на E. Canis Титр 1:320-1280
2 S3-S4 Средняя положительная реакция на E. Canis Титр 1:80-1:160
3 ≥S5 Высокая положительная реакция на E. Canis Титр 1:320-1280
4 S1-2 Низкая положительная реакция на E. Canis Титр 1:20-1:40
5 S0 Отрицательная реакция на E. Canis Отрицательный
6 *Нет положительной ссылки Неверно
7 *Нет положительной ссылки Неверно
8 S0 Отрицательная реакция на E. Canis Отрицательный
9 *Высокий цвет фона - мешает чтению. Неверно
10 ≥S3 Положительная реакция с высоким фоном. Положительный
11 S3-S4 Средняя положительная реакция на E. Canis Титр 1:80-1:160
12 S1-2 Низкая положительная реакция на E. Canis Титр 1:20-1:40

*Повторите тест.

Другой способ чтения результатов — это использование прибора CombScan. Это программа, которая использует компьютер и TWAIN совместимый сканер. Когда Гребень помещается в сканер, программа считывает цветовой результат в числовом значении. CombScan помогает лаборатории в чтении результатов ImmunoComb и сохранении данных. Программа устанавливается бесплатно по запросу.

11.Меры предостережения и хранение теста
• Хранить набор при температуре 2-80С. Не замораживать набор.
• Перед проведением теста выдержите все элементы набора и исследуемые
образцы при комнатной температуре примерно 60-120 минут (или инкубируйте
Проявочную ванночку 22 минуты при 370C). Исследование проводится при комнатной температуре (20-250C).
• Избегайте утечки и перекрестного контаминирования растворов.
• Перемешивайте реагенты путем переворачивания проявочной ванны несколько раз до использования.
• Не смешивайте реагенты разных наборов или разных ячеек одного набора.
• Не касайтесь зубцов Гребня.
• При использовании проявочной ванны вскрывайте покрытие каждой ячейки, строго следуя процедурным инструкциям. Не снимайте алюминиевое покрытие проявочной ванны все сразу.

• Набор ИммуноКомб содержит инактивированный биологический материал. С набором следует обращаться и утилизировать его в соответствии с принятыми санитарно- гигиеническими нормами.

12.Содержимое набора

Компоненты Тест набор на 12 исследований (50LCL 201) Тест набор на 120 исследований (50LCL210)
A. Гребень (в алюминиевой оболочке) 1 10
B. Проявочная ванна 1 10
C. Одноразовый пинцет 1 1
D. Прибор CombScale 1 1
E. Набор из 12 капилляров и одного поршня 1 Под заказ
Инструкция 1 1

13.Литература

Harrus S et al. (2002). Vet Microbiol. 86 (4), 361-368.
Waner T et al. (2000). Jl of Vet Diag Invest. 12, 240-244.
Waner T (1999). Diag of Canine Monocytic Eh Thesis, Utrecht U. Waner T et al. (1997). Vet Para. 69, 307-317.

Производитель:
Biogal – Galed Labs, Galed 19240
M.P. Megidol, Израиль
Tel: 972-4-9898605 • Fax: 972-4- 9898690
E-mail: This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it. • Site: www.biogal.co.il