Этот комплект разработан, чтобы определить в крови или сыворотке крови титр антител к IgG Chlamydophila psittaci (ранее известный как Chlamydia psittaci) у различных видов птиц.

Время постановки 60 мин
Чувствительность 100%
Количество тестов 12/120
Индивидуальный анализ Есть

Таблица интерпретации результата

Цвет	ImmunoComb® оценка (S)	Результат	Примечание
Белый	0	Отрицательный	Нет антител к C. psittaci. Повторное тестирование через 7-10 дней при острой стадии болезни у птицы.
След серого	>0 - 1	Подозрительный	Переменная, в зависимости от вида птицы (см. ссылку таблицу видов птицы).
Слабый серый	>1 - 2	Низкоположительный	Низкий титр антител к C. Psittaci. (см. ссылку таблицу видов птицы).
Чёткий серый	3 - 4	Положительный	Умеренный уровень антител к C. psittaci.
Тёмный серый	5 - 6	Высоко положительный	Высокий титр антител к C. psittaci. Цвет ImmunoComb® оценка (S) Результат Примечание Белый 0 Отрицательный Нет антител к C. psittaci. Повторное тестирование через 7-10 дней при острой стадии болезни у птицы. След серого >0 - 1 Подозрительный Переменная, в зависимости от вида птицы (см. ссылку таблицу видов птицы). Слабый серый >1 - 2 Низкоположительный Низкий титр антител к C. Psittaci. (см. ссылку таблицу видов птицы). Чёткий серый 3 - 4 Положительный Умеренный уровень антител к C. psittaci. Тёмный серый 5 - 6 Высоко положительный Высокий титр антител к C. psittaci.

Таблица чувствительности

/	Очень Чувствительные (1)	Чувствительные	Менее чувствительные (2)
Попугаи	Африканский серый попугай Ара (Ара) Жако Краснохвостый попугай Амазон Какаду Розелла	Неразлучник Длиннохвостый (волнистый) попугай Princess (роскошный попугай Александры) Корелла Всё семейство лориевых попугаев Обыкновенный лори
Другие птицы	Индейка Павлин Фазан Цесарка	Страус Перепел Майна говорящий скворец Сова Чёрный коршун Стервятник Тукан	Голубь Пеликан Лебедь Орел Скворец

1. Подозрительные или низкие положительные результаты не существенны у этих птиц (т.е. «ложноположительные результаты»).
2. Подозрительные или низко положительные результаты, скорее всего, будут важны у этих птиц.

ImmunoComb®

AVIAN CHLAMYDOPHILA PSITTACI ANTIBODY TEST KIT Инструкция

23.12.12

Предназначен для 10/100 исследований

1. Назначение

Бесприборная иммуноферментная тест-система разработана, чтобы определить в крови или сыворотке крови титр антител к IgG Chlamydophila psittaci (ранее известный как Chlamydia psittaci. Тест-система может быть использована в учреждениях с ограниченными возможностями для лабораторных исследований и помочь в диагнозе клинических случаев.

2. Что такое ImmunoComb

ИммуноКомб ® представляет собой автономный портативный комплект. Чувствительный тест, который определяет уровень антител в крови или сыворотке крови. ИммуноКомб ® обеспечивает результат в течение 60 - 120 минут.

3.Общая информация

Chlamydophila psittaci-это бактерия, которая заражает многие виды птиц и может передаваться человеку, вызывая заболевание, как правило, известное как Хламидиоз. Это заболевание еще называют Орнитоз ("Лихорадка попугаев") у попугаев и других птиц и Орнитоз у кур и индеек. Люди, которые занимаются разведением и содержанием птиц и контактированием с инфицированной птицей имеют более высокий риск заражения Орнитозом. Инфицирования C. psittaci обычно передается воздушно-капельным путем. Обнаружение антител может помочь в диагностике.

4.Как работает ImmunoComb

В тест-системе ImmunoComb® используется метод непрямого твёрдофазного иммуноферментного анализа (ИФА). ИммуноКомб ® представляет собой пластиковую карточку в виде гребня, на который нанесён очищенный антиген Chlamydophila psittaci.
На первом этапе образец сыворотки крови или бумажный диск, пропитанный кровью, вносится в ячейку ряда А Проявочной ванны.
Положительный и Отрицательный контрольные образцы, поставляемые в комплекте, должно применяться в отдельных скважинах ряда А.
Далее Гребень вставляется в ячейку с образцом и переносится в оставшиеся ячейки через определенный интервал времени в соответствии с инструкцией.

Специфичные IgG антитела из образца, при их наличии, связываются с антигеном на точке зубца Гребня и помечаются в ряде С, который содержит меченные ферментом антитела к IgG антителам птицы.

Гребень переносится в следующую ячейку (ряд B), где вымываются несвязавшиеся антитела.

Гребень вставляется в следующую ячейку (ряд С), которая содержит антитела к IgG антителам птицы, помеченные ферментом, которые связываются с комплексом антиген-антитело на зубце гребня.

После еще двух промывок (ряд D и E) Гребень переносится в следующую ячейку (ряд F), где проявляется цвет благодаря ферментативной реакции.

Интенсивность цвета результата соответствует уровню антител в тестируемом образце. Результаты оцениваются с использованием точки Положительного контроля контрольного образца и калибровочной шкалы CombScale..

Верхняя точка — это Внутренний контроль. Для индивидуального или группового исследования отламывается необходимое количество зубцов Гребня.

5.Клинические признаки

Инфицированные птицы могут отображать спектр различных клинических симптомов от неявных до тяжелого заболевания, с поражением, в основном, дыхательных путей. Больная птица кажется «неряшливой» и появляются глазной выделения из глаз и носовых ходов с появлением или отсутствием диареи (поноса).
Chlamydophila обнаруживается в пероральной, гланой и дыхательной секреции и в фекалиях птицы. Инфицированые, но внешне здоровые птицы, а также больные птицы, выделяют Chlamydophila. Однако, выделения может быть прерывистым, поэтому отрицательный результат от каловых масс или мазок из клоаки взятые для исследования не всегда исключают возможность того, что птицы могут быть инфицированы.

6.Диагностика

Ряд конкретных анализов используется в настоящее время для диагностики C.
psittaci инфекции у птиц. Тесты делятся на 2 категории:
1. Выявление антигена в выделениях организма, или из кала и мазки из клоаки: Методы включают метод прямой Иммунофлюоресценции, ПЦР и выделение культуры.. Основные ограничения этих методов возможность ложноотрицательных результатов, из-за непостоянного выделения Chlamydophila из организма и требование специального лабораторного оборудования и опыт работы на нём, чтобы выполнить тесты.
2. По оценке Chlamydophila антител в крови птиц: методы включают РСК, РА и ИФА, которая включает себя набор ИммуноКомб для тестирования антител. Эти серологические методы обладают тем преимуществом, которое позволяет определить инфицированную птицу, которые не выделяет Chlamydophila. Все методы, кроме ИммуноКомб выполняются специализированными лабораториями. Эти серологические методы обладают тем преимуществом, что могут идентифицировать зараженную птицу, которая не может не выделяет возбудителя. Все методы, за исключением ImmunoComb выполняются специализированными лабораториями.

7. Меры предостережения и хранение теста

Хранить набор при температуре 2-80С. Не замораживать набор.

Перед проведением теста выдержите все элементы набора и исследуемые образцы при комнатной температуре примерно 60-120 минут (или инкубируйте Проявочную ванночку 22 минуты при 370C). Исследование проводится при комнатной температуре (20-250C).

Избегайте утечки и перекрестного контаминирования растворов.

Перемешивайте реагенты путем переворачивания проявочной ванны несколько раз до использования.

Не смешивайте реагенты разных наборов или разных ячеек одного набора.

Не касайтесь зубцов Гребня.

При использовании проявочной ванны вскрывайте покрытие каждой ячейки, строго следуя процедурным инструкциям. Не снимайте алюминиевое покрытие проявочной ванны все сразу.

Набор ИммуноКомб содержит инактивированный биологический материал. С набором следует обращаться и утилизировать его в соответствии с принятыми санитарно-гигиеническими нормами.
Рис.1 Два Зубца проявленного Гребня (пример).

( верхняя точка – внутренний контроль, нижняя точка – результат С. Psittasi (ASP)

8.Процедура анализа на ИммуноКомб

Выполнять анализ при комнатной температуре 20 ° - 25 ° C (68 ° - 77 ° F).
Анализ проводится при температуре 200-250C (680—770F).

Продезинфицировать ножницы тампоном, смоченным спиртом. Коготь осмотрите, чист ли он, при необходимости также можно продезинфицировать тампоном со спиртом.

Используйте бумажный диск, тщательно обрежьте один из когтей на пальце ноги птицы

Используйте чистую пару маникюрных ножниц, чтобы обрезать ноготь на пальце ноги настолько, чтобы найти начало вены и получить кровь. Это должно быть приблизительно 2/3 расстояния от корня когтя на пальце ноги (См. рисунок ниже).

Удалите первую каплю крови с помощью ватного тампона, потом
осторожно приложите перфорированный диск и дайте впитать в себя несколько капель крови. Когда кровоток замедляется, следует осторожно сжать
палец несколько раз. Необходимо полностью заполнить диск с обеих сторон фильтровальной бумаги. Обычно необходимо 1-3 капли крови.
Когда образец был получен, положите фильтр-бумагу, чтобы высушить, на чистую поверхность. Проверьте, что у птицы больше нет кровотечения, прежде чем вернуть её в клетку. Чтобы остановить дальнейшее кровотечение используйте кровоостанавливающие средства или, в качестве альтернативы, можно использовать крахмал или муку.

После того, как диск полностью высохнет, его можно хранить в пластиковом мешке или использовать для тестирования.

Используйте пинцет для вскрытия алюминиевой защитной пленки ряда А (одна ячейка для одного образца)

Возьмите диск с образцом крови,

вставьте его в ячейку ряда А, полностью погрузив в реактив. То же проделайте и с
другими образцами.

 

 

! Выдержите диск в течение 60 минут при комнатной температуре, что позволит извлечь антитела из образца.

 

можно использовать 5 мкл сыворотки/плазмы вместо целых дисков крови.
В этом случае внесите образец с помощью пипетки в ячейку ряда A, хорошо перемешайте! В этом случае сразу переходите к следующему пункту.
Откройте далее 2 последующих ячейки ряда А для контрольной сыворотки. Возьмите 5 мкл Положительного контроля сыворотки (C +) и внесите в ячейку рядом с исследуемым образцом. Перемешайте содержимое в ячейке. Сделайте то же самое с Отрицательной контрольной сывороткой (C-), также входящего в состав набора, в следующей ячейке.

Примечание:
Выньте гребень из защитной обертки. Для тестирования менее 12 образцов, разрежьте или отломите Гребень по меткам в зависимости от количества тестов. Выньте гребень из защитной обертки. Для тестирования менее 12 образцов, разрежьте или отломите Гребень по меткам в зависимости от количества тестов.

Вставьте Гребень в открытую ячейку/ячейки ряда А (печатной стороной к себе) и инкубируйте 20 минут. Для улучшения перемешивания аккуратно передвигайте Гребень вверх вниз в начале каждой инкубации (каждого ряда).

Используйте пинцет для вскрытия следующего ряда (ряд В) и вставьте Гребень на 2 минуты. До перенесения Гребня из одного ряда в следующий, вскройте последующий ряд. Слегка стряхните лишнюю жидкость на ткань. Промойте обе стороны гребня в течение 5 секунд под чистой прохладной водой из-под крана.

Вставьте Гребень в следующий ряд (ряд С) на 20 минут. Промойте под водой и вставьте в ряд D на 2 минуты. Стряхните лишнюю жидкость. Переместите Гребень, в ячейку ряда E и выдержите в течение 10 минут, позволяя цветному процессу развиваться. Стряхните снова и вставьте Гребень в Ряд F на 2 минуты для фиксации цвета. Выньте Гребень и дайте ему высохнуть в течение 1-10 мин.

9.Чтение и интерпретация результатов антител IgG

 

1. По окончании теста сразу же прочитайте результат.. При чтении этого раздела обратитесь к примеру проявленного Гребня и таблицы интепретации результатов.
2. Нижняя точка на Гребне показывает результат по Chlamydophila psittaci.

3. Оцените результаты каждого пятна отдельно.

4. Уровень IgG C. psittaci определяется путем сравнения интенсивности цвета точки каждого образца с интенсивность цвета точки результатов Положительного Контроля (C+) .

5. Интенсивность пурпурно-серого цвета, полученного на диагностических точках, оценивается по шкале от 1 до 6, путём сравнения результатов теста с цветовым результатом точки Положительного контроля, который всегда оценивается как 3 , а так же при помощи шкалы CombScale.

6. Результаты с идентичной или более высокой цветовой интенсивностью, чем Положительный контроль оцениваются ≥S3, который указывает высокий титр антител. Результаты оценённые как S2 так же считаются положительными. Результаты, оценённые как <2 и <1, считаются неокончательными.

7. Различные виды птиц имеют различную чувствительность в этом анализе. Низкий положительный результат может не быть существенным у более чувствительных видов птиц и наоборот. Для получения дальнейшей информации о степени чувствительности разных видов птиц обратитесь к таблице ниже в инструкции.

8. Отрицательный контроль состоит из не-иммунных сывороток и должен рассматриваться как ноль (S = 0). Образцы без цвета или только со следами пурпурно-серого цвета оцениваются как S0 или S1 и считаются отрицательными.

9. В следующем разделе Вы найдете пример проявленного Гребня и интерпретации его результатов.

10. Сухой Гребень может быть сохранен как результат для отчета.

 

10. Чтение результатов с combscale.
Когда Гребень полностью высохнет, откалибруйте его по шкале CombScale. Найдите тон пурпурно-серый на шкале, который наиболее близко подходит к точке Положительного контроля сыворотки. Двигая желтую линейку, найдите отметку С+, появившуюся в окошке над цветом, который вы только что нашли.

 

Держите линейку в таком положении на протяжении всего чтения результатов. Этот шаг фактически калибрует С+ к S3, с которыми будут сравниваться точки теста.
Удерживая линейку, найдите тон на шкале, который будет наиболее точно подходить к точке результата теста (нижняя точка). Значение, которое появится в окошке сверху, является оценкой CombScale

11.Пример проявленного Гребня

 

ПРИМЕЧАНИЯ И РЕЗУЛЬТАТЫ ("S")

Номер теста	результат	Примечание                      и показатели (S)
1, 5	Высокая    положительная реакция к C. psittaci	S >3
2,7	Положительная реакция к C. psittaci	S ≥ 2
3	Низкая       положительная реакция к C. psittaci	S1-2    Неопределенный   - считается подозрительным.
4,10	Отрицательная реакция к C. psittaci	Отрицательный S<1

6	Высокий           фон            с положительной реакцией	Положительный ACP
8	Нет внутреннего контроля -           проявление          не выполнено.	Недействительный анализ
9	Высокий цвет фона	Недействительный анализ
11	Положительный контроль	S 3
12	Отрицательный контроль	S 0

Другой способ чтения результатов — это использование прибора CombScan. Это программа которая использует компьютер и TWAIN совместимый сканер. Когда Гребень помещается в сканер, программа считывает цветовой результат в числовом значении. CombScan помогает лаборатории в чтении результатов ImmunoComb и сохранении данных. Устанавливается бесплатно по запросу.

Как и во всех диагностических тестах, окончательный клинический диагноз не должен основываться исключительно на серологических результатах, но должен быть поставлен ветеринарным врачом после того, как все клинические и лабораторные результаты исследования были оценены.

 

12.Содержимое набора

Компоненты	Тест      на       10 исследований	Тест     на      100 исследований
A.      Гребень      (в       алюминиевой оболочке)	1	10
B. Проявочная ванна	1	10
C.    Два   листа    перфорированной бумаги с дисками	2	12
D. Одноразовый пинцет	1	1
E. Прибор CombScale	1	1
F.     Набор     из    12     каппилярных трубочек и поршня	1	Можно приобрести отдельно по запросу
G. Сыворотки для  положительного и отрицательного контроля	1	1

13. Вариабельность иммунного ответа по ImmunoComb® к C. Psittaci у разных видов птиц.

Справочная диаграмма

	Очень Чувствительные (1)	Чувствительные	Менее чувствительные (2)
Попугаи	Африканский серый попугай Ара (Ара) Жако Краснохвостый попугай Aмазон Какаду Розелла	Неразлучник длиннохвостый (волнистый) попугай Princess (роскошный попугай Александры) Корелла Всё семейство лориевых попугаев Обычный лори
Другие птицы	Индейка Павлин Фазан Цесарка	Страус Перепел Майна, говорящий скворец Сова Чёрный коршун Стервятник Тукан	Голубь Пеликан Лебедь Орел Скворец

1. Подозрительные или низкие положительные результаты не существенны у этих птиц (т.е. «ложноположительные результаты»).
2. Подозрительные или низко положительные результаты, скорее всего,
имеют важное значение у этих птиц.

14. Литература

Bendheim et al. (1994). Proceedings of Deutsch Veterinarmedizinische Gesellschaft, Munchen, Germany.

Lublin et al. (1997). The 4th Conference of the European Committee of the Association of Avian Veterinarians, May, London, England.

Morales et al. (2007). Proceedings of the 12th International Conference of the Association of Institutions for Tropical Veterinary Medicine (AITVM), Montpellier, France, 20-22 August, 2007. Does control of animal infectious risks offer a new international perspective?

Phalen et al. (1999). Proceedings: Birds and all that Jazz. 20th Annual Conference and Expo, September, New Orleans, Louisiana, USA.
Phalen D. N. (2001). Seminars in Avian & Exotic Pet Medicine, 10 (2), 77-89.